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更新時(shí)間：2015-03-17
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CA1080 支原體檢測(cè)試劑盒 solarbio
貨號(hào)：CA1080
保存：4℃保存，有效期為2年，Hoechst 工作液需要避光保存。
產(chǎn)品內(nèi)容：
Hoechst 33258 工作液 100mL 200mL
固定液 100mL 200mL
抗熒光衰減封片液 20mL 40mL
說(shuō)明書(shū) 1 份 1 份
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測(cè)支原體污染，這種染料會(huì)結(jié)合到DNA 的A-T 富集區(qū)域，因?yàn)橹гw的DNA 中A-T 含量高（55%～80%），所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA 染色斑，說(shuō)明有支原體污染。Hoechst 33258 的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；
Hoechst 33258 和雙鏈DNA 結(jié)合后，大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。
操作步驟：
貼壁細(xì)胞：
1. 被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時(shí)，接種正常無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。
2. 5 天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1mL 的固定液，靜置20min，
3. 吸去固定液，晾干。
4. 于每孔中，加入1mL 的Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），
37℃避光放置15-20min 或室溫靜置20～30min。
5. 吸去Hoechst 33258 工作液，加入2mL 滅菌超純水洗滌三次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片
液，并以蓋玻片覆蓋。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
懸浮細(xì)胞：
1. 收集需檢測(cè)的細(xì)胞，1500rpm，5min。
2. 將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上，再加1mL 的固定液，靜置20min。
3. 吸去固定液，晾干。
4. 于每孔中，加入1mL 的Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），
37℃避光放置15～20min 或室溫靜置20～30min。
5. 吸去Hoechst 33258 工作液，用無(wú)菌水洗滌玻片3 次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液，并以
蓋玻片覆蓋。
6. 熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。
結(jié)果判斷（參考）：
陰性：僅見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽(yáng)性：除細(xì)胞外，細(xì)胞周圍可見(jiàn)大量的大小均一的熒光著色顆粒。
注意事項(xiàng)：
1. Hoechst 工作液對(duì)人體有害，請(qǐng)注意防護(hù)。
2. 固定液有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行固定。
3. 支原體檢測(cè)時(shí)，好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2～3 代，這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4. 本試劑盒用于6 孔板檢測(cè)時(shí)，可以進(jìn)行50 次檢測(cè)反應(yīng)。
5. 檢測(cè)支原體污染，可以使用支原體Vero 細(xì)胞，這樣可以提高檢測(cè)靈敏度，即將被檢測(cè)樣品
接種于Vero 細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。
相關(guān)產(chǎn)品：
P2100 10×多聚賴氨酸
S2100 抗熒光衰減封片劑
C0020 Hoechst 33258 染液（即型）
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