4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI

DNA鏈熒光染色。

DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。

DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。

DAPI的大激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，大激發(fā)波長(zhǎng)為364nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm。

本DAPI溶液用水配制，加熱有助于溶解。

用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/ml。

運(yùn)輸與保存方法
常溫運(yùn)輸。粉末在室溫下穩(wěn)定，需避光儲(chǔ)存。
注意事項(xiàng)
1)DAPI對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
2)熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。
3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
4)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
配制母液
用雙蒸水溶解，終濃度為1mg/ml。本產(chǎn)品不可以用緩沖液直接溶解。-20℃可保存1年，建議分裝保存，避免反復(fù)凍融。
使用方法
1.配制工作液：用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10μg/ml）。
2.固定的細(xì)胞或組織染色：
對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。
b)吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。
3. 活細(xì)胞或組織染色：
a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液。
b)在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。
c)用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。

4',6-二脒基-2-苯基吲哚 DAPI