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胃蛋白酶活性檢測試劑盒

胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通過測定吸光值的變化來計算酶活。

胃蛋白酶活性檢測試劑盒

一、粗酶液提取：稱取約 0.1g 組織或者 0.1ml 胃液，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。10000 rpm 4℃離心 10 分鐘，取上清，即粗酶液，置冰上待測。

二、測定步驟：

1. 酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 275 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 按下表操作：測定管 對照管樣本（μL） 20 - 試劑一（μL） 100 100 混勻，37℃保溫 10min。試劑三（μL） 100 100 搖勻 1min。樣本（μL） - 20 混勻后 10000rpm 4℃ 離心 10min，取上清用石英比色皿/96 孔 UV 板測定 A275nm。

1、用石英比色皿

按樣本蛋白濃度計算：活性單位（U）定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/mg prot）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（Cpr×V 樣本）÷T = 0.786×?A÷Cpr （2） 按樣本鮮重計算：活性單位（U）定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/g）胃蛋白酶（U/g 鮮重）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（W×V 樣本÷V 提）÷T =0.786×?A÷W。 Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V 反總：反應(yīng)總體積，0.22mL；V 提：提取液體積，1mL；T：催化反應(yīng)時間，10min；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；?：酪氨酸吸光系數(shù)，1.4? mol-1·mL·cm-1 ；d：光程，1cm。

2、用 96 孔 UV 板按樣本蛋白濃度計算：活性單位（U）定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/mg prot）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（Cpr×V 樣本）÷T = 1.57×?A÷Cpr （3） 按樣本鮮重計算：活性單位（U）定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸為一個酶活單位。胃蛋白酶（U/g）胃蛋白酶（U/g 鮮重）=（?A÷?÷d×V 反總）÷（W×V 樣本÷V 提）÷T =1.57×?A÷W。 Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V 反總：反應(yīng)總體積，0.22mL；V 提：提取液體積，1mL；T：催化反應(yīng)時間，10min；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；?：酪氨酸吸光系數(shù)，1.4? mol-1·mL·cm-1 ；d：光程，0.5cm。