鈣熒光探針 Fluo 3-AM 細(xì)胞檢測

鈣熒光探針 Fluo 3-AM 細(xì)胞檢測產(chǎn)品說明

Ø Fluo-3 AM 是常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。分子式為 C₅₁H ₅₀Cl ₂N ₂O ₂₃，分子量為

1129.85。

Ø Fluo-3 和 Fura-2 相比，其優(yōu)點是：一方面可以被氬離子激光(argon-ion laser) 的 488nm 激發(fā)光激發(fā)，便于檢測；另一方面，Fluo-3 和鈣離子結(jié)合后熒光變化更強，即對鈣離子濃度變化的檢測更加靈敏；同時，Fluo-3 和鈣離子的結(jié)合能力較弱，這樣可以比 Fura-2 檢測到細(xì)胞內(nèi)更高濃度的鈣離子水平；此外，對于細(xì)胞內(nèi)的鈣離子的即時變化反應(yīng)得更加準(zhǔn)確，減小了因為和鈣離子解離速度慢而導(dǎo)致的熒光變化滯后。

Ø 本 Fluo-3 AM (鈣離子熒光探針) 是配制于無水DMSO (anhydrous DMSO)中的儲存液，濃度為 5mM。

Ø Fluo-3 AM 是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM 的熒光非常弱，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。

Fluo-3 AM 進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成 Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3 可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強的熒光，大激發(fā)波長為 506nm，大發(fā)射波長為 526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為 488nm 左右，發(fā)射波長為 525-530nm。

用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測時，Fluo-3 AM 的常用濃度為 0.5-5μM 。通常用含有 0.5-5μM 的 Fluo-3 AM 的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在 20-37℃孵育 15-60 分鐘進(jìn)行熒光探針裝載，隨后適當(dāng)洗滌，洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30 分鐘以確保Fluo-3 AM 在細(xì)胞內(nèi)*轉(zhuǎn)變成 Fluo-3。

Ø 本 Fluo-3 AM 在 4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以 20-25℃水浴溫育片刻全部融解后使用。

Ø 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

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