磷酸化蛋白提取試劑盒用于哺乳動物組織和細(xì)胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強(qiáng)烈，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn)，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產(chǎn)品組成:

操作方法:
1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個(gè)過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清至新的管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長時(shí)間儲存。)

注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會快速降解；

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標(biāo)題:Mechanistic studies on protective effects of total flavonoids from Ilex latifolia Thunb. on UVB-radiated human keratinocyte cell line (HaCaT cells) based on network pharmacology and molecular docking technique

成員:Yunge Ma, Yingyan Li, Yike Yao, Tao Huang, Chong Lan, Liyan Li

論文因子:3.3 發(fā)表期刊:PHOTOCHEMISTRY AND PHOTOBIOLOGY pmid:38644599

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標(biāo)題:Blocking protease-activated receptor 4 alleviates liver injury induced by brain death

成員:Hongbo Fang, Zibo Yuan, Yaohua Zhu, Hongwei Tang, Chun Pang, Jie Li, Jihua Shi, Wenzhi Guo, Shuijun Zhang

論文因子:3.322 發(fā)表期刊:BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS pmid:35093640

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標(biāo)題:Chlorogenic acid, rutin, and quercetin from Lysimachia christinae alleviate triptolide-induced multi-organ injury in vivo by modulating immunity and AKT/mTOR signal pathway to inhibit ferroptosis and apoptosis

成員:Xiaohui Wu, Junming Wang, Bingyin Li, Mingzhu Gong, Can Cao, Lingling Song, Lingyu Qin, Yanmei Wang, Yueyue Zhang, Yamin Li

論文因子:3.8 發(fā)表期刊:TOXICOLOGY AND APPLIED PHARMACOLOGY pmid:36963520

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標(biāo)題:Effects of host vimentin on Eimeria tenella sporozoite invasion

成員:Liu Zhan, Geng Xiangfei, Zhao Qiping, Zhu Shunhai, Han Hongyu, Yu Yu, Huang Wenhao, Yao Yawen, Huang Bing, Dong Hui

論文因子:4.047 發(fā)表期刊:Parasites & Vectors pmid:34983604

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標(biāo)題:miR 199b 5p inhibits triple negative breast cancer cell proliferation, migration and invasion by targeting DDR1

成員:Anhao Wu,Yan Chen,Yang Liu,Yafang Lai,Dequan Liu

論文因子:1.664 發(fā)表期刊:Oncology Letters pmid:30250555

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

磷酸化蛋白提取試劑盒

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