產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

  同常規(guī)試劑盒相比，本試劑盒通過(guò)優(yōu)化分離液相關(guān)成分，進(jìn)一步提高了小鼠外周血中性粒細(xì)胞的分離純度，更適用于流式細(xì)胞儀分選等下游實(shí)驗(yàn)操作。

產(chǎn)品組成：

操作步驟：(僅供參考)

1、 沉降去除紅細(xì)胞：取新鮮抗凝血與血液稀釋液(注射用生理鹽水或1XPBS)及紅細(xì)胞沉降液按照1:1:1比例混勻，室溫下靜置30-40min后，可見(jiàn)紅細(xì)胞沉于試管底部，小心吸盡上清層(富含白細(xì)胞及血小板)用于后續(xù)細(xì)胞分離。 

2、 樣本分離：在15mL離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑B沿管壁緩慢疊加（45°傾斜試管）于試劑A之上，形成梯度界面，將沉降后上清小心平鋪于分離液液面上方。（注意分離液與樣本總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果。）

3、 室溫條件下水平轉(zhuǎn)子600-1000g，25-30minutes(血液體積越大所需離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),最佳分離條件需摸索，離心最大轉(zhuǎn)速不超過(guò)1000g)。

4、 離心后，上層白膜層為單個(gè)核細(xì)胞層，下層白膜層為粒細(xì)胞層。

5、小心吸取粒細(xì)胞層至新的離心管中，加入10mL細(xì)胞洗滌液洗滌細(xì)胞。250g，離心10min（如有紅細(xì)胞污染可依據(jù)樣本體積加入適量紅細(xì)胞裂解液祛除污染）。

6、 棄上清，加入5mL細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心10min。

7、 棄上清，重懸細(xì)胞備用。

注意事項(xiàng)：

A.開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免微生物污染。

B.請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要預(yù)先無(wú)菌分裝分離液試劑，并在其恢復(fù)至室溫（18℃~25℃）后使用，如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層不清晰。

C.血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2h以?xún)?nèi)），為保持中性粒細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。

D.稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。

E.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。

F.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索最佳的分離條件。

G.如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，注意全程保持無(wú)菌操作，避免微生物污染。

小鼠外周血中性粒細(xì)胞分離(Plus)試劑盒

小鼠外周血中性粒細(xì)胞分離(Plus)試劑盒